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阿魏酸酯酶活性試劑盒50管/48樣
測(cè)定原理
所需的儀器和用品
試劑盒組分與配制
測(cè)定意義
阿魏酸酯酶（FAE，EC 3.1.1.73），又稱肉桂酸酯酶或肉桂酸水解酶，是一種胞外羧酸酯酶，能夠水解植物細(xì)胞壁中阿魏酸與多糖或木質(zhì)素之間的酯鍵，釋放游離阿魏酸并促進(jìn)多糖降解。
NADPH 氧化酶（NAO）將 NADPH 氧化為 NADP+的同時(shí)生成超氧陰離子(O2 .- )，接著與顯色劑反應(yīng)生成水溶性的黃色物質(zhì)。對(duì)照通過添加該酶的特異性抑制劑 DPI 排除背景值。最終檢測(cè)生成的有色物質(zhì)在 450nm 處的吸光值，即可計(jì)算得出 NAO 酶活性大小。
測(cè)定原理
阿魏酸酯酶(FAE)催化底物阿魏酸甲酯分解，通過檢測(cè)阿魏酸甲酯于340nm的下降速率即可得出阿魏酸酯酶(FAE)酶活力大小。
所需的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、無水乙醇、蒸餾水
試劑盒組分與配制
提取液：液體60mLx1瓶，4℃保存；
試劑一：液體8mLx1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加入2mL無水乙醇溶解；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑x1支，若重做標(biāo)曲，則用到該試劑，4℃避光保存；
注意
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
